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古朵簡述:熒光抗體染色三大方法

發布時間:2022-08-26 閱讀:66

  標簽:熒光抗體 古朵生物 染色液


  古朵簡述:熒光抗體染色三大方法


  熒光定量PCR 因操作方便、運行速度快、實驗結果準-確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的今-天,也許對你來說,難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,要詳細研究各種極富you惑力的宣傳資料。面對各種不同性能的產品,您又該如何選擇呢?

  古朵帶您認識熒光定量PCR的兩個誤區:

  誤區一:儀器通道越多越好

  隨著PCR技術的成熟運用,多重擴增越來越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。從蕞初ABI公司推出的單通道熒光定量PCR儀發展到如今各個廠家都推出4通道、5通道甚至6通道熒光定量PCR儀,眼花繚亂的選擇讓人無所適從,就有人一不小心走進了“通道越多越好”的誤區。

  考慮多重熒光定量PCR的通道數的時候也應該從實驗室實際情況出發,多重PCR并非人人適用、人人可用,因為它使實驗復雜化了。

  誤區二:PCR儀無需梯度功能

  對于使用染料法的定量PCR反應,雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經驗公式計算熔解溫度(Tm值),但運用的公式不同、引物序列不同,Tm值的差異會很大。引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變萬化,對于特殊片斷,經驗公式得到的數據不一定能得出準-確的結果,退火溫度細微的差異對結果都可能產生決定性的影響,因而“摸條件”一度是讓人很頭疼的問題。梯度PCR的出現部分解決了一些問題——在反應過程中每個孔的溫度控制條件可以在zhi定范圍內按照梯度變化,根據結果,一步就可以摸索出z適合的反應條件。

  不單退火溫度,連變性溫度和延伸溫度都可以優化——對于多種聚合酶混合酶擴增如Invitrogen、Clontech、Promega的多數高保真Taq酶來說這個非常重要,因為Taq和校正酶的蕞佳反應溫度可能有顯著差異,優化延伸溫度就顯得很重要。

  當我們走出誤區,想要選擇一款z適合自己需求的熒光定量PCR儀時我們又該關注些什么呢?

  1、 儀器的檢測通量

  在購買定量PCR儀的時候要根據實驗實的需要來選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測通量小到16個多到384個。如果進行一般的基因表達研究或病原體檢測,實在不必購買昂貴的儀器,96孔的通量足夠用;需要尋找要新藥靶點和疾病標記的實驗室可以考慮購買384孔板的儀器。假如經費有限無法購買384孔板儀器的實驗室,可以考慮購買運行速度快(帶有FAST模塊)的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器,你會發現樣品的制備和小體系、多樣本的PCR體系構建成為限制實驗速度和結果的頸瓶。

  2、 硬件設計特點

  熒光定量PCR儀主要有傳統的96孔板式、創新的離心式等,每種設計都有它的獨到之處但也都有無法避免的缺憾。

  傳統的96孔板的熒光定量PCR可以容納的樣本量大,而且無需特殊的耗材。有些傳統的96孔板的儀器采用鹵鎢燈激發、CCD檢測,這些光學結構在96孔板的頂部,每個樣品孔距光源和檢測器的光程各不相同——邊緣效應,對結果產生影響。為了保-證精-確、準-確的實驗結果,這類儀器在實驗過程中通常會使用ROX(一種熒光染料)或專用的Reference dye作為參照校正實驗結果。

  3、 運行速度

  在熒光定量PCR儀的眾多技術參數中,升降溫速度也是廠家喜歡大力宣傳的指標??斓纳禍?,可以縮短反應進行的時間,而且縮短了可能的非特異性結合、反應的時間,提高PCR的特異性。

  4、 靈活性

  大規模繁忙的實驗室設備固然讓人羨慕,但是常規實驗室同樣可以有精彩的選擇?,F在的儀器供應商擁有眾多技術專家,有的還能提供整個分子生物學的基礎研究平臺,不但了解、滿足您現在的需求,而且還考慮到了你可能變化的需求——升級和換模塊。

  古朵簡述:熒光抗體染色三大方法 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量”的方針。

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