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Elisa試劑盒競爭法測抗原步驟及注意事項

發布時間:2022-09-01 閱讀:38

  標簽:Elisa試劑盒 古朵生物 酶標抗體


  Elisa試劑盒競爭法測抗原步驟及注意事項


  當抗原材料中的干擾物質不易除去,或不易得到足夠的純化抗原時,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合。標本中抗體量越多,結合在固相上的酶標抗體愈少,因此陽性反應呈色淺于陰性反應。如抗原為高純度的,可直接包被固相。如抗原中會有干擾物質,直接包被不易成功,可采用捕獲包被法,即先包被與固相抗原相應的抗體,然后加入抗原,形成固相抗原。洗滌除去抗原中的雜質,然后再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式,可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合,抗HBc ELISA一般采用此法。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合,洗滌后再加入酶標抗體,與結合在固相上的抗原反應??笻Be的檢測一般采用此法。

  Elisa試劑盒 實驗步驟

  1. 以稀釋液將待檢標本做適當稀釋(預試中確定)加入包被有已知抗原的酶標板中(50ul/孔),加封口膠帶于37℃作用30min。

  2. 棄反應液,以沖洗液連續洗板5次并于吸水紙上拍干。

  3. 加入酶標抗體(濃度在預試中確定)。加封口膠帶后于37℃作用30min。

  4. 重復第2步。

  5. 加底物(濃度在預試中確定),加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min,其間不時觀察,顯色滿意后加終止液50ul/孔。

  6. 于酶標儀測定OD值,OPD用492nm測定,TMB用450nm測定。

  注意事項

  1. 每次實驗均應做陰性對照、陽性對照及空白對照(以PBS代替標本),后者為本底值,在分析實驗結果時應扣除本底值,陽性對照<陰性對照<空白對照實驗成立。

  2. 一般認為小分子抗原宜用本法檢測,而大分子抗原則宜采用夾心法檢測,但具體宜采用哪種方法應根據試驗決定,本發與夾心法相比在操作上減少一步。包被抗體與酶標抗體如果分別采用單克隆抗體和多克隆抗體時,宜用單克隆抗體作為包被抗體,以多克隆抗體作為酶標抗體。

  3. 血清標本中抗原濃度一般較低,故一般用原倍標本進行檢測,必要時可進行稀釋測定,但應重新摸索酶標抗原的濃度,以確保方法的靈敏性。

  4. 以酶標記抗原的方法同酶標記抗體。

  5. 其它注意事項同酶聯免疫間接法。

 Elisa試劑盒競爭法測抗原步驟及注意事項 上海古朵生物科技有限公司成立于上海浦東新區。是一家專門從事生物技術相關產品,勵志研發和銷售的綜合性生物公司,產品遠銷多個國家和地區,我們將一如既往地秉承“一切為了滿足客戶的需求”的經營宗旨;牢固樹立“以客戶需求為準則、以市場需求為導向,不斷開發高質量的新產品,提供客戶滿意的綜合服務質量”的方針。

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